實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)的軟件特點(diǎn):
●反應(yīng)板設(shè)置指南軟件使實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)非常簡(jiǎn)單,包括復(fù)雜的多色熒光實(shí)驗(yàn);
●可選擇快速、標(biāo)準(zhǔn)或者9600反應(yīng)模式;
●實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增曲線(xiàn);
●實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可以增加PCR循環(huán)數(shù);
●自動(dòng)設(shè)置熒光基線(xiàn),自動(dòng)計(jì)算熒光閾值使數(shù)據(jù)分析大大簡(jiǎn)化;
●可在同一反應(yīng)板采用多種標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)靶基因進(jìn)行定量,可以簡(jiǎn)化工作流程以及下游產(chǎn)物分析;
●基因表達(dá)相對(duì)定量軟件提供強(qiáng)大的結(jié)果分析顯示,可以自動(dòng)將多達(dá)10塊96孔板基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)同時(shí)分析,并自動(dòng)去除無(wú)關(guān)項(xiàng)數(shù)據(jù);
●自動(dòng)SNP分析軟件可以簡(jiǎn)單直觀的圖表輸出分型結(jié)果并自動(dòng)進(jìn)行分型質(zhì)量評(píng)分;
●解離曲線(xiàn)數(shù)據(jù)采集操作簡(jiǎn)單,觀察方便,可以在儀器運(yùn)行時(shí)觀察解離曲線(xiàn)數(shù)據(jù);
●觀察實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線(xiàn)時(shí)可以非常方便的標(biāo)定所對(duì)應(yīng)的樣品孔位置;
●光源使用時(shí)間監(jiān)測(cè)及儀器系統(tǒng)自我診斷程序。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)的反應(yīng)體系和條件:
?。?)模板濃度與純度:模板的初始濃度越低,結(jié)果的重復(fù)性越差。初始濃度越高,超出了反應(yīng)體系的線(xiàn)性范圍,則需要對(duì)模板進(jìn)行稀釋?zhuān)駝t隨著底物的過(guò)早耗盡,可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。如果待測(cè)模板的濃度處于PCR反應(yīng)體系的較低檢出限附近。則需要檢測(cè)雙份以結(jié)果的可靠性。
?。?)酶及其濃度:TaqDNA聚合酶有兩種,一種是從棲熱水生桿菌中提純的天然酶:另一種是從大腸埃希菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反應(yīng)需要2。5U的酶。濃度過(guò)高可引起非特異性擴(kuò)增,濃度過(guò)低則合成產(chǎn)物量減少。
(3)Mg2+的濃度:Mg2+對(duì)PCR擴(kuò)增的特異性和產(chǎn)物有顯著影響。Mg2+的濃度過(guò)高,會(huì)增加引物二聚體的形成;Mg2+的濃度過(guò)低,會(huì)降低TaqDNA聚合酶的活性。